【Beoogd gebruik】

De kit is een realtime fluorescerende PCR van TaqMan om ORF1ab, N-genen-nucleïnezuur van 2019-nCoV in keeluitstrijkje en sputum kwalitatief te detecteren bij patiënten met vermoedelijke symptomen van longontsteking en Clustering-gevallen.

De testresultaten zijn alleen bedoeld voor klinische referentie en kunnen niet worden beschouwd als enige maatstaf voor klinische diagnose. Het wordt aanbevolen om een ​​gemanifesteerde analyse uit te voeren met betrekking tot klinische symptomen en andere laboratoriumresultaten.

Exploitanten moeten ervaring hebben met professionele training op het gebied van genamplificatie of het testen van moleculair biologische methoden, en over relevante kwalificaties beschikken voor laboratoriumactiviteiten. Het laboratorium moet over redelijke biologische veiligheidsmaatregelen en beschermende procedures beschikken.

【Testprincipe 】

In deze kit zijn primers en probes ontworpen voor respectievelijk de geconserveerde en specifieke regio's van ORF1ab, N van 2019-nCoV. Fluorescerende PCR wordt gebruikt om viraal RNA te detecteren na nucleïnezuurzuivering van monster-RNA.

Deze testkit maakt gebruik van real-time fluorescerende PCR-technologie. Tijdens PCR-amplificatie bindt de probe aan de template en wordt de 5'-uiteinde-reportergroep van de probe gesplitst door het Taq-enzym (5' → 3'-exonuclease-activiteit), waardoor zich wegbewegend van de uitdovende groep om een ​​fluorescerend signaal te genereren. De real-time amplificatiecurve wordt automatisch uitgezet op basis van het gedetecteerde fluorescentiesignaal, en de Ct-waarde van het monster wordt berekend (het aantal cycli dat wordt ervaren wanneer het fluorescentiesignaal in elke reactiebuis de vaste drempel bereikt). FAM-, VIC- en Texas-rode fluoroforen worden gebruikt om ORF1ab-gen en N-genprobes in reactieoplossing te markeren. Door gebruik te maken van één test kan kwalitatieve detectie van de bovengenoemde twee genen van 2019-nCoV gelijktijdig worden uitgevoerd.

Om vals-negatieve resultaten te voorkomen, is de kit voorzien van een interne controle (IC), die is gemarkeerd met een Cy5-fluorescentiegroep die kan worden gebruikt om de extractieprocedure en de reactieoplossing te controleren.

【Hoofdcomponenten 】

Let op ¹ : De verschillende partijen onderdelen kunnen niet geruild worden.

Opmerking ² : De testkit bevat geen nucleïnezuurextractiereagens. Bereid het reagens voor gebruik voor.

1. Monsterbehandeling

Voeg 10 μl interne controle toe aan respectievelijk 200 μl positieve controle en negatieve controle om de nucleïnezuurextractie uit te voeren.

2. Reagensvoorbereiding:

Systeemvoorbereiding: Neem een ​​vooraf geïnstalleerde lyofilisator voor nucleïnezuuramplificatie, open vervolgens het foliezakje en centrifugeer het onmiddellijk. De monsterhoeveelheid van elke test moet een veelvoud van 8 zijn, met één positieve controle en één negatieve controle. Voeg 35 μl nucleasevrij water toe aan elke reactiebuis.

3. Voorbeeld laden:

Voeg 5 μl monsternucleïnezuur toe dat moet worden getest, positieve controle, negatieve controle dat het hele reactievolume 40 μl is in de toegewezen reactieoplossing. Omdat er geen fijn mengsel nodig is, sluit u gewoon het deksel van de PCR-reactiebuis en centrifugeert u de vloeistof in de buiswand op de bodem van de buis, verwerk zo de PCR-amplificatie.

Na verificatie wordt geschat dat toevoeging van 5 μl-10 μl paraffineolie aan het PCR-systeem het PCR-resultaat niet zal beïnvloeden, maar contaminatie en vloeistofverdamping zal voorkomen.