[Principe van detectie]

Dit product is een Taqman RT-qPCR-testsysteem op basis van multiplex fluorescente probes. De Taqman fluorescerende sondeis een specifiek oligonucleotide gebaseerd op een reporter-quencher-mechanisme. Voor elke probe werd het 5'-uiteinde gelabeld met een fluorofoor, terwijl het 3'-uiteinde werd gelabeld met een quencher. Wanneer de probe intact is, wordt de door de fluorofoor uitgezonden fluorescentie geabsorbeerd door de quencher en wordt er geen fluorescentiesignaal gedetecteerd. Tijdens amplificatie van de matrijs zal de probe echter worden afgebroken als gevolg van de 5'-3'-exonuclease-activiteit van Taq DNA-polymerase, en worden de fluorescerende reporter en de quencher gesplitst en gescheiden, waarna een fluorescerend signaal kan worden gedetecteerd. Het genereren van elk moleculair amplicon gaat gepaard met het genereren van een fluorescent signaal. Real-time monitoring van het gehele PCR-proces kan worden beoordeeld door de accumulatie van fluorescente signalen te monitoren.

[Instrumenten]

Let op: kleurcompensatie is vereist voor Roche lightcycler480